Описание

Введение. Статья рассматривает синтез рекомбинантного белка rFc IgG, который включает C H 2 и C H 3 домены Fc-фрагмента человеческого IgG1, а также его использование для получения поликлональных антител к человеческому IgG. Основная цель исследования заключается в оценке иммуногенности созданного рекомбинантного белка и его способности вызывать выработку специфических антител у мышей. Актуальность работы заключается в важности разработки методов получения антител для диагностики и терапии, в частности, полиантител к IgG человека, которые могут быть использованы в научных и клинических целях.

Методология. Исследование проводилось с использованием бактерий E. coli для синтеза rFc IgG. Генетическая конструкция rFc IgG была создана с использованием технологий рекомбинантной ДНК, включая выделение РНК из клеточной линии, синтез комплементарной ДНК (кДНК) и клонирование в экспрессирующий вектор. Для получения мышиных антисывороток производилась иммунизация животных рекомбинантным белком. Использовался метод ELISA для оценки специфичности полученных антител.

Основные результаты. Установлено, что синтезированный рекомбинантный белок показывает высокую иммуногенность у мышей, что подтверждается выработкой антител к человеческому IgG. Достижение максимального разведения 10^6 раз свидетельствует о высокой специфичности антител. Однако были обнаружены и недостатки, такие как перекрестная реактивность с IgM человека и высокая вариабельность значений титров антител от различных животных.

Обсуждение и интерпретация. Авторы интерпретируют полученные результаты, указывая на возможность использования rFc IgG как полидетерминантного антигена для индукции выработки антител с высокой специфичностью к IgG человека. Тем не менее, результаты демонстрируют проблемы с гетерогенностью антител, что требует дальнейшего анализа и выбора образцов с учетом их авидности и специфичности. Результаты исследований сопоставляются с предыдущими данными, подтверждающими существование схожих проблем в области получения поликлональных антител.

Заключение. Исследование продемонстрировало успешный синтез рекомбинантного белка rFc IgG, который может быть использован для получения анти-IgG поликлональных антител. Кроме того, результаты подчеркивают значимость контроля качества антител и необходимость дальнейших исследований по улучшению их специфичности. В качестве ограничений работы упоминается высокая вариабельность титров и необходимость оптимизации иммунизационных схем для получения более однородного материала. Рекомендация для будущих исследований включает разработку методов повышения специфичности антител и тестирование на других модельных системах.

Ключевые слова: рекомбинантный белок, Fc-фрагмент иммуноглобулина G, поликлональные антитела, иммунизация, иммуногенность.

Библиография: 1. Leenaars P. P. et al. The production of polyclonal antibodies in laboratory animals. Alternatives to Laboratory Animals, 1999. 2. Catty D. Antibodies: a practical approach, vol. 2. Oxford, 1989. 3. Novotny J., Handschumacher M., Haber E. Location of antigenic epitopes on antibody molecules. Journal of Molecular Biology, 1986. 4. Hajighasemi F. et al. Production and characterization of mouse monoclonal antibodies recognizing human pan-IgG. Avicenna Journal of Medical Biotechnology, 2012. 5. Nelson P. et al. Characterization of epitopes of pan-IgG. Immunology Letters, 2003.