ИНДИКАЦИЯ ТОКСИГЕННЫХ ESCHERIСHIA COL I С ПОМОЩЬЮ ИНФУЗОРИЙ

Описание

Аннотация

Резюме Изучена возможность использования инфузорий с целью биотестиро- вания токсигенных Escheriсhia coli, вызывающих диарею у молодняка крупного рогатого скота и свиней. Было испытано 4 вида инфузорий - Paramecium caudatum, Stylonychia mytilus, Colpoda steinii и Tetrahymena pyriformis. Инфу- зорий выращивали на среде Лозина-Лозинского. Эшерихии инкубировали в бульоне Хоттингера. Суть метода заключалась в том, что на предметное стекло наносили 3 капли суточной среды культивирования инфузорий, после чего проводили подсчет их количества под увеличением 2 × 8, после чего добавляли 1 каплю бульонной тест-культуры E.coli. Спустя 5 минут производили предвари- тельный, а через 2 ч окончательный просмотр и подсчет количества живых инфу-зорий. Установлено, что инфузории видов Paramecium caudatum, Colpoda steinii и Tetrahymena pyriformis не пригодны для тестирования токсигенных свойств эшерихий, так как первые два не погибают при добавлении культуры патогенной E.coli, а третий вид напротив весьма чувствителен и погибает даже при добавлении стерильного бульона Хоттингера. Специфически чувствительным к экзотоксинам эшерихий оказался только вид Stylonychia mytilus. В наибольшей степени на стилонихии оказывают губительное влияние цито-токсины (STX, СNF) эшерихий, обуславливая гибель данных инфузорий при 2-часовой экспозиции с суточной культурой в количестве 22-47%. Под действием цитотонинов (TL, TS, GEM) эшерихий стилонихии погибали в меньшем количестве - 7-21%. Использование метода биотестирования на стилонихиях позволило установить, что накопление экзотоксинов в среде культивирования происходит в течение 6-7 дней. Однако культивирование энтеротоксигенных эшерихий более 6 дней приводит к инактивации TL-, TS-токсинов.Development of a method of biotesting of a toxigenicity of Escheriсhia coli with use of ciliates is the purpose of the study. E. coli strains isolated from animals with diarrhea symptoms and corpses were used. Existence of genes which are responsible for development of the thermolabile, thermostable, Shiga-like and necrotizing toxins is established using the method of polymerase- chain reaction. Ciliates of 4 types - Paramecium caudatum, Stylonychia mytilus, Colpoda steinii and Tetrahymena pyriformis - are used as biological targets for these toxins. The environment of cultivation of escherichias - Hottinger’s broth, the environment of cultivation of infusorians - Lozina-Lozinsky. Results of research: it is established that with big degree of reliability specifcally sensitive to toxins of escherichias were only Stylonychia mytilus infusorians. At addition in habitat of stilonikhiya of 24-hour cultures of the escherichias containing toxins there is a death from 12 to 45% of cages of infusorians. The most toxic effect E.coli - STX 1, 2 and SNF cytotoxins have, these products cause death of 23-45% of Stylonychia mytilus. To a lesser extent for infusorians of this look E.coli tsitotonina - TL and TS under the infuence of which 12-22% of infusorians perish are. By a biotesting method on infusorians of Stylonychia mytilus it was determined that the maximum accumulation of cytotonics happens for 5-6 days, and cytotoxins - for 6-7 days.